eIF2C1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437349-ACT

O gene Ago1 de camundongo codifica a eIF2C1, uma proteína da família Argonaute que se liga a pequenos RNAs e atua como efetor central da interferência por RNA. A eIF2C1 participa do silenciamento gênico pós-transcricional guiado por miRNAs e siRNAs, influenciando a estabilidade e a tradução de mRNAs e moldando programas de expressão gênica ligados à diferenciação, proliferação e respostas ao estresse. Por meio de interações no complexo RISC e em vias relacionadas de pequenos RNAs, a Ago1 contribui para a regulação epigenética e transcricional em múltiplos tecidos. A desregulação de redes de pequenos RNAs dependentes de Argonaute tem sido associada a alterações na sinalização imune, fenótipos do neurodesenvolvimento e estados transcricionais oncogênicos, tornando a Ago1 um nó relevante para estudos mecanísticos dos circuitos de regulação gênica.

eIF2C1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ago1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF2C1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ago1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ago1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF2C1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ago1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF2C1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF2C1 em células tumorais com expressão de Ago1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.