eIF2α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400199

Panoramica

EIF2S1 codifica la subunità alfa del fattore eucariotico di inizio della traduzione 2 (eIF2α), un regolatore centrale dell’inizio della traduzione cap-dipendente e della proteostasi. La fosforilazione di eIF2α in Ser51 integra l’azione di diverse chinasi sensibili allo stress (PERK/EIF2AK3, GCN2/EIF2AK4, PKR/EIF2AK2 e HRI/EIF2AK1) per modulare la disponibilità del complesso ternario, sopprimere la sintesi proteica globale e promuovere programmi di traduzione selettiva, come quello di ATF4, nell’ambito della risposta integrata allo stress. Attraverso questa via, eIF2α collega lo stress del reticolo endoplasmatico, la carenza di amminoacidi, il rilevamento dei virus e lo stress ossidativo a un rimodellamento trascrizionale e traduzionale adattativo. Una segnalazione di eIF2α deregolata è implicata nella tolleranza allo stress delle cellule tumorali, in fenotipi neurodegenerativi legati all’aggregazione proteica e in stati metabolici e infiammatori, tramite un controllo traduzionale alterato e dinamiche modificate dei granuli di stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EIF2S1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EIF2S1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EIF2S1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF2α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EIF2S1 per lo studio della segnalazione di eIF2α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EIF2S1 critici per la funzione di eIF2α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EIF2S1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF2α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eIF2α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EIF2S1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF2α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eIF2α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EIF2S1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EIF2S1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.