EHZF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404324-ACT

ZNF521は、ヒトの亜鉛フィンガータンパク質EHZFをコードしており、細胞運命の制御、増殖、系譜決定に関連する遺伝子発現プログラムを調節する核内の転写制御因子です。EHZFはDNA結合性の亜鉛フィンガードメインと共制御複合体との相互作用を介して、造血系および神経系の文脈で重要なクロマチン依存的転写ネットワークに影響を与えます。ZNF521の発現異常は、複数のがん関連モデルで観察される分化状態の変化や異常な増殖シグナル伝達と関連づけられており、腫瘍性転写回路の研究において重要な対象となっています。より広範な転写・エピジェネティック経路の結節点として、EHZFは幹細胞様表現型、発生関連遺伝子プログラム、ならびに状況依存的な制御フィードバックへの影響という観点から、しばしば解析されています。

EHZF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZNF521の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EHZF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZNF521 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZNF521転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EHZFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZNF521遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEHZF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZNF521発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEHZF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。