EHHADH CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404068-ACT

EHHADH（エノイルCoAヒドラターゼ／3-ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼ）は、ペルオキシソームに局在する二機能性酵素をコードしており、ペルオキシソーム脂肪酸β酸化における連続する反応段階を触媒することで、超長鎖および分岐鎖脂肪酸アシルCoAの鎖長短縮を担います。脂質分解とレドックスバランスに関与することを通じて、EHHADHはペルオキシソームとミトコンドリア間の代謝クロストークや、細胞のエネルギーホメオスタシスの調節に寄与します。EHHADHの発現や活性の変化は、ペルオキシソーム機能障害に関連する表現型や、脂質蓄積、酸化ストレス、肝臓の代謝適応など、代謝疾患に関係する過程と関連づけられています。そのためEHHADHは、ペルオキシソーム主導の脂質代謝、オルガネラ恒常性、ならびに代謝ストレスに結びつく転写プログラムを研究するうえで有用な標的です。

EHHADH CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EHHADHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EHHADH CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EHHADH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEHHADH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EHHADHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEHHADH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEHHADH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEHHADH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEHHADH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。