eHAND CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403311-ACT

HAND1は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子eHANDをコードしており、中胚葉のパターニングと心血管発生を制御する主要なレギュレーターです。eHANDは、系譜決定、細胞移動、モルフォゲンにより駆動される転写ネットワークなどを統御する遺伝子発現プログラムを調整し、E-box配列を含む制御エレメントとの相互作用や、発生シグナル伝達経路とのクロストークにも関与します。ヒトではHAND1活性の変化が先天性心疾患の発生異常や胎盤／栄養膜（トロフォブラスト）の異常と関連づけられており、心臓形成および初期胚における遺伝子制御回路を研究するうえで有用な標的となります。

eHAND CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HAND1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eHAND CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HAND1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHAND1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eHANDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHAND1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeHAND依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHAND1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeHAND経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。