Partículas Lentivirales de Activación (h) EGFL6: sc-411850-LAC

EGFL6 codifica una proteína secretada asociada a la matriz extracelular que pertenece a la familia tipo EGF y que contribuye a las interacciones célula–matriz y a la señalización del microambiente. EGFL6 se ha relacionado con la regulación del comportamiento de células endoteliales y epiteliales, incluida la migración, la adhesión y la supervivencia, lo que es coherente con funciones en la remodelación tisular y en procesos asociados a la angiogénesis. A través de sus dominios tipo EGF, EGFL6 puede modular redes de señalización que se intersecan con vías mediadas por integrinas y con programas sensibles a factores de crecimiento que influyen en la dinámica del citoesqueleto. Se ha informado de una expresión desregulada de EGFL6 en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como una herramienta molecular para estudiar la remodelación vascular, la biología del microambiente tumoral y los fenotipos de motilidad celular en sistemas modelo humanos.

Las partículas de activación lentiviral EGFL6 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de EGFL6 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral EGFL6 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción EGFL6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de EGFL6. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo EGFL6 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.