EDIL3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404813-ACT

EDIL3（EGF様リピートおよびディスコイジンI様ドメイン3。別名DEL-1）は、分泌型で細胞外マトリックスに関連する糖タンパク質をコードし、インテグリン依存的な相互作用を介して細胞接着、細胞移動、組織リモデリングを調節します。ヒト細胞では、EDIL3は内皮細胞の挙動の制御や、血管新生および炎症性の微小環境を形作る細胞外シグナルの調整に関与し、白血球―内皮相互作用の動態やマトリックスの構築に影響を与えます。EDIL3発現の異常は、血管リモデリングや腫瘍関連ストローマといった状況で報告されており、血管新生、免疫制御、転移ニッチ生物学の研究における重要性が示唆されています。これらの特性により、EDIL3は細胞外マトリックスシグナル、インテグリン経路のクロストーク、ならびに微小環境駆動の表現型を解明するための有用な標的となります。

EDIL3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EDIL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EDIL3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EDIL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEDIL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EDIL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEDIL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEDIL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEDIL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEDIL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。