EDG-1/S1P1/S1PR1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400413-NIC

S1PR1（EDG-1/S1P1）は、スフィンゴシン-1-リン酸（S1P）に対するGタンパク質共役型受容体（GPCR）をコードしており、内皮バリアの完全性、血管成熟、免疫細胞のトラフィッキングを制御する。受容体の活性化によりGi依存性シグナル伝達が誘導され、下流のPI3K–AKT、MAPK/ERK、RhoファミリーGTPase経路が作動して、細胞骨格ダイナミクス、接着結合（アドヘレンスジャンクション）の構築、走化性応答が形成される。造血系および血管系の文脈において、S1PR1はサイトカイン／ケモカインネットワークとの統合を通じて、リンパ球の組織外への移出、血管新生スプラウティング、炎症トーンに寄与する。S1PR1シグナルの破綻は、炎症、心血管領域、生体内の腫瘍微小環境に関する研究において、血管透過性や免疫恒常性の変化と関連づけられており、受容体シグナル研究における機序解明の要所（メカニスティック・ノード）としての有用性が支持されている。

EDG-1/S1P1/S1PR1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における S1PR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、S1PR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、S1PR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、S1PR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。