EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400413-ACT

S1PR1（EDG-1/S1P1）は、スフィンゴシン-1-リン酸（S1P）に応答するGタンパク質共役型受容体（GPCR）であり、細胞外の脂質シグナルを統合して、内皮バリアの完全性、血管成熟、免疫細胞トラフィッキングを制御する。リガンド結合により、S1PR1は主にGiに共役し、PI3K–AKT、MAPK/ERK、ならびにRac/Rhoファミリー経路のシグナル伝達を協調的に制御することで、細胞骨格ダイナミクス、接着結合（adherens junction）の安定性、走化性応答の形成に関与する。この受容体は血管新生とリンパ球の組織外移出（egress）の中核を担い、S1P濃度勾配を、血管系およびリンパ系コンパートメントをまたぐ細胞の協調的な移動と位置決めに結び付けている。S1PR1シグナルの破綻は、炎症性シグナルネットワーク、血管機能障害、腫瘍微小環境の生物学に関与するとされ、免疫、透過性、ならびに転移関連プロセスの機序研究における標的としての有用性を支持している。

EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性S1PR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EDG-1/S1P1/S1PR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における S1PR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はS1PR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EDG-1/S1P1/S1PR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のS1PR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEDG-1/S1P1/S1PR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびS1PR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEDG-1/S1P1/S1PR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。