Edc3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402917-ACT

ヒトEDC3は、進化的に保存されたmRNAデキャッピング促進因子であるEdc3をコードしており、DCP1–DCP2デキャッピング複合体と追加のリプレッサー（抑制因子）を結び付けることで転写産物のターンオーバーを促進する。Edc3は細胞質のプロセシングボディ（P-body）で機能し、翻訳抑制と5′→3′方向のmRNA分解を共役させることによって転写後の遺伝子制御に関与し、その結果、定常状態におけるRNA量やストレス応答性の発現プログラムを形成する。RNA安定性の制御を通じて、EDC3はプロテオスタシス、自然免疫系のストレスシグナル伝達、ならびにトランスクリプトームの迅速な再編成に依存する細胞状態の転換を司る経路に影響を与える。mRNA分解の異常やP-body動態の破綻は、がん生物学や神経変性と広く関連付けられているため、EDC3は疾患関連文脈におけるRNA代謝の機構研究に有用な結節点となる。

Edc3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EDC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Edc3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EDC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEDC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Edc3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEDC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEdc3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEDC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEdc3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。