ECM2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-436571-ACT

マウスEcm2は、分泌性のマトリックス関連成分である細胞外マトリックスタンパク質2（ECM2）をコードしており、間質の構築を組織化し、細胞—マトリックス相互作用を調節する因子として関与すると考えられています。ECM2は、細胞接着、遊走、組織形態形成に影響を及ぼす細胞外マトリックス（ECM）リモデリング過程に寄与し、線維芽細胞の活性や基底膜の完全性を制御する経路とも交差します。ECM組成の変化やECM2に関連したマトリックス動態は、線維化様リモデリング、創傷修復、腫瘍微小環境の生物学の研究において重要であり、そこでの間質由来のシグナルが細胞の表現型を規定します。そのためEcm2の発現は、結合組織の恒常性や炎症に伴う細胞外環境の変化を扱うモデルで、しばしば解析対象となります。

ECM2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ecm2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ECM2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ecm2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEcm2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ECM2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEcm2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるECM2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEcm2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるECM2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。