EBF1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401258-NIC

Early B-cell factor 1（EBF1）は、配列特異的にDNAに結合する転写因子であり、系譜決定と分化をプログラムする。B細胞の発生において中心的な役割を担うとともに、抗原受容体シグナル伝達、細胞周期制御、クロマチンアクセシビリティに関与する遺伝子の発現調節にも重要である。EBF1は他の造血系制御因子と協調して、前駆細胞の成熟や細胞アイデンティティの維持を司る転写ネットワークを確立する。EBF1の発現や機能の破綻は免疫細胞分化の異常と関連しており、血液悪性腫瘍の生物学や免疫系の発生の文脈でしばしば研究されている。核内の制御因子として、EBF1はリンパ系／非リンパ系の双方の状況において、エンハンサー—プロモーター制御や転写回路を解明するための機構的な切り口を提供する。

EBF1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EBF1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EBF1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EBF1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EBF1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。