EAAT3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401539-ACT

SLC1A1は、興奮性アミノ酸トランスポーター3（EAAT3）をコードしています。EAAT3は高親和性のナトリウム依存性グルタミン酸／アスパラギン酸トランスポーターであり、細胞外の興奮性アミノ酸濃度の調節を助けるとともに、代謝および酸化還元バランスの維持に必要な細胞内グルタミン酸の利用可能性を支えます。EAAT3の活性は、神経伝達物質のクリアランス、シナプスシグナルの恒常性維持に寄与し、さらに、システイン取り込みやグルタチオン合成と交差するグルタミン酸依存的経路を介して、酸化ストレスに対する神経細胞の脆弱性にも関与します。ヒト組織においてSLC1A1は、神経系および上皮における輸送プロセスと関連しており、興奮性神経伝達の変調や細胞ストレス応答という観点から研究されてきました。SLC1A1の遺伝学的変化や発現変動は、神経精神疾患および神経発達に関わる表現型と関連づけられており、トランスポーターの制御機構や下流シグナル伝達の解明を目的とした機序研究が進められています。

EAAT3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC1A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EAAT3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC1A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC1A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EAAT3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC1A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEAAT3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC1A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEAAT3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。