EAAT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422984

Panoramica

Slc1a2 codifica il trasportatore di amminoacidi eccitatori 2 (EAAT2), un trasportatore del glutammato ad alta capacità e Na+-dipendente, espresso prevalentemente negli astrociti, che rimuove il glutammato sinaptico per mantenere la neurotrasmissione eccitatoria e prevenire lo stress eccitotossico. EAAT2 modella la segnalazione glutamatergica accoppiando l’ingresso del glutammato ai gradienti ionici e sostenendo l’accoppiamento metabolico astrocita–neurone tramite il ciclo glutammato–glutammina. Attraverso la regolazione dell’omeostasi del glutammato extracellulare, Slc1a2 influenza la plasticità sinaptica, la sopravvivenza neuronale e l’eccitabilità di rete. Alterazioni della funzione o dell’espressione di EAAT2 sono state collegate a meccanismi rilevanti per neurodegenerazione, epilessia e neuroinfiammazione, rendendo Slc1a2 un bersaglio comune negli studi sulle vie del SNC.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc1a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc1a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc1a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EAAT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc1a2 per lo studio della segnalazione di EAAT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc1a2 critici per la funzione di EAAT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc1a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EAAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EAAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc1a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EAAT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EAAT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc1a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc1a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.