E2F-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400880-ACT

E2F2 codifica o fator de transcrição humano E2F-2, um regulador-chave da progressão do ciclo celular e da transição G1/S, que coordena a expressão de genes necessários para a replicação do DNA e a entrada em mitose. A atividade de E2F-2 é rigidamente controlada por proteínas da família RB e integra sinais que influenciam a proliferação, o controle de checkpoints e a diferenciação. A desregulação da expressão de E2F2 ou alterações a montante na via RB/E2F são frequentemente associadas a programas aberrantes de genes do ciclo celular observados em múltiplos contextos tumorais e em distúrbios proliferativos. Como regulador transcricional nuclear, E2F-2 também é utilizado para estudar a arquitetura de redes transcricionais, respostas ao estresse replicativo e o controle do crescimento específico de linhagem.

E2F-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de E2F2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

E2F-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus E2F2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição E2F2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de E2F-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus E2F2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de E2F-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via E2F-2 em células tumorais com expressão de E2F2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.