Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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E-cadherin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400031-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- E-cadherin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- E-cadherinダブルニカースプラスミド（h）およびE-cadherinダブルニカースプラスミド（h2）は、CDH1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: E-cadherin 抗体 (G-10): sc-8426
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
E-cadherin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400031-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
E-cadherin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400031-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDH1 は E-カドヘリンをコードしており、E-カドヘリンは Ca2+ 依存性のアドヘレンスジャンクション構成タンパク質として、同種分子間の細胞―細胞接着を仲介し、上皮の極性および組織構築の維持に寄与する。E-カドヘリンは β-カテニン、p120-カテニン、ならびにアクチン細胞骨格との連結を介して、接着部位のリモデリング、接触阻害、メカノトランスダクションを協調的に制御し、さらに β-カテニンの利用可能性に影響を与えることで Wnt/β-カテニンシグナル伝達を間接的に調節する。CDH1 の破綻は上皮バリアの完全性を損ない、上皮―間葉転換（EMT）などの細胞の脱分化プログラムを促進するため、浸潤や転移関連の表現型、組織形態形成の異常といった文脈で頻繁に研究されている。CDH1 の欠失または機能不全は上皮性がんで反復して認められるほか、遺伝性びまん性胃がんにも関与しており、ヒトモデルにおける接着依存的シグナル伝達と上皮恒常性を検討する上で重要な遺伝子座である。
E-cadherin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDH1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDH1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDH1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDH1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。