Dyskerin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401278-ACT

ヒトのDKC1はジスケリンをコードしており、H/ACA型スモールヌクレオラーRNP複合体を安定化し、rRNAおよびsnRNAのシュードウリジル化を触媒する必須の核小体タンパク質である。これにより、リボソーム生合成とpre-mRNAスプライシングの忠実性が支えられる。ジスケリンはまた、テロメラーゼRNA成分に結合することでテロメラーゼホロ酵素とも会合し、テロメア維持とゲノム安定性に寄与する。これらの機能を通じて、DKC1は増殖ストレス下におけるRNAプロセシングを、細胞周期制御、DNA損傷応答、ならびにプロテオスタシスと統合している。DKC1の発現異常や変異は、テロメア生物学に関わる疾患や造血系・上皮系の恒常性破綻と関連しており、リボヌクレオタンパク質のアセンブリおよび核小体機能の機構研究における重要な標的となっている。

Dyskerin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DKC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dyskerin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DKC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDKC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dyskerinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDKC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDyskerin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDKC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDyskerin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。