Dynein IC1, cytosolic Double Nickaseプラスミド (h): sc-405213-NIC

DYNC1I1 は、微小管に沿ったマイナス端方向の輸送を駆動するダイニン–ダイナクチン運動複合体の中核サブユニットである、細胞質ダイニン1中間鎖1をコードする。Dynein IC1 は、カーゴの認識とモーター活性の制御に寄与し、エンドソームおよびリソソームの配置、ゴルジ体の構築、紡錘体の動態、ならびにニューロンにおける軸索内逆行性輸送を支える。これらの過程を通じて、DYNC1I1 は細胞内輸送、細胞分裂、オルガネラからの空間的シグナル伝達の協調に関与する。ダイニン複合体構成要素の機能異常は、神経発達および神経変性の機序に加え、染色体不安定性やプロテオスタシス経路の変化との関連でしばしば研究されている。

Dynein IC1, cytosolic ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DYNC1I1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DYNC1I1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DYNC1I1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DYNC1I1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。