Dynein HC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400919-ACT

DYNC1H1 は、細胞質ダイニン1重鎖（cytoplasmic dynein 1 heavy chain）をコードしており、微小管のマイナス端方向へ移動するモーターとして、小胞、オルガネラ、mRNA、タンパク質複合体の長距離輸送を駆動します。ダイニン重鎖の活性は、ダイナクチンやカーゴアダプターとの協調的な相互作用を介して、有糸分裂紡錘体の構築、中心体の位置決め、エンドソーム／リソソーム輸送、軸索における逆行性輸送を支えます。細胞骨格輸送機構の中核要素として、DYNC1H1 は神経細胞の維持や、極性・プロテオスタシス・ストレス応答を形作る細胞内ロジスティクスに不可欠です。DYNC1H1 の遺伝学的な異常は、神経発達および神経筋の表現型と関連づけられており、軸索障害、運動ニューロンの脆弱性、輸送依存的シグナル伝達の研究において重要な標的となります。

Dynein HC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DYNC1H1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dynein HC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DYNC1H1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDYNC1H1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dynein HCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDYNC1H1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDynein HC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDYNC1H1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDynein HC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。