DSC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403386-ACT

O DSC2 humano codifica a desmocolina-2, uma caderina desmossomal dependente de cálcio que medeia a adesão célula–célula e contribui para a integridade da barreira epitelial e o acoplamento mecânico entre células vizinhas. O DSC2 participa da montagem e estabilização dos desmossomos por meio de interações com plakoglobina, plakofilinas e desmoplaquina, conectando complexos juncionais aos filamentos intermediários e coordenando a arquitetura tecidual durante a diferenciação e sob estresse. A expressão alterada de DSC2 ou a remodelação desmossomal está associada à adesão comprometida, a uma comunicação cruzada aberrante de sinalização e a mudanças na motilidade celular relevantes para a patobiologia epitelial. Como os desmossomos integram funções estruturais e de sinalização, o DSC2 é frequentemente estudado em modelos de dinâmica juncional, organização do citoesqueleto e homeostase tecidual.

DSC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DSC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DSC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DSC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DSC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DSC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DSC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DSC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DSC2 em células tumorais com expressão de DSC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.