DRP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400459-ACT

DNM1Lは、ダイナミン関連タンパク質1（DRP1）をコードしている。DRP1は大型のGTPアーゼであり、MFF、MID49/51、FIS1などのアダプタータンパク質と協調してオルガネラ膜上に集合し、膜を収縮させることで、ミトコンドリアおよびペルオキシソームの分裂を統括する。オルガネラ形態の制御を通じて、DRP1はバイオエネルゲティクス、マイトファジー、アポトーシスシグナル、ならびに細胞分裂時や神経輸送におけるミトコンドリアの再配置に影響を及ぼす。DRP1活性はストレス応答経路と統合されており、リン酸化、SUMO化、ユビキチン化、S-ニトロシル化によって制御されることで、細胞内シグナル伝達とミトコンドリアダイナミクスを結び付けている。DNM1L/DRP1機能の破綻は、神経発達・神経変性の表現型、心代謝機能障害、がんに関連する代謝リモデリングに関与するとされ、ミトコンドリア恒常性の機構研究における重要な結節点となっている。

DRP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNM1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DRP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNM1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNM1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DRP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNM1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDRP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNM1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDRP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。