DR6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402038-ACT

O gene humano TNFRSF21 codifica o receptor de morte 6 (DR6), um membro da superfamília de receptores de TNF que modula o desenvolvimento neuronal, a sinalização imune e a apoptose por meio de vias mediadas por receptores. O DR6 pode recrutar proteínas adaptadoras para influenciar a ativação de caspases e interage com as vias de sinalização NF-κB e MAPK, moldando programas transcricionais responsivos a citocinas. Em contextos neurais, o DR6 tem sido associado à poda axonal e à remodelação sináptica, enquanto em células imunes contribui para a regulação da ativação e da sobrevivência celular. A desregulação da sinalização TNFRSF21/DR6 tem sido associada a fenótipos inflamatórios e tem sido investigada no contexto de mecanismos relacionados a neurodegeneração e oncologia, o que sustenta sua utilidade como um nó de via para estudos funcionais.

DR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DR6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DR6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DR6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DR6 em células tumorais com expressão de TNFRSF21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.