DOCK 8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401727

Panoramica

DOCK8 codifica un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) che attiva le GTPasi della famiglia Rho, coordinando il rimodellamento del citoscheletro di actina necessario per la migrazione e l’adesione delle cellule immunitarie e per la formazione della sinapsi immunologica. DOCK8 supporta la sopravvivenza e la segnalazione dei linfociti, influenzando processi quali chemiotassi, attivazione guidata dall’antigene e funzione effettrice citotossica. L’alterazione di DOCK8 è associata a fenotipi di immunodeficienza primaria caratterizzati da risposte antivirali compromesse, infiammazione allergica e maggiore suscettibilità alle neoplasie, a conferma del suo ruolo centrale nell’omeostasi immunitaria. Negli studi meccanicistici, DOCK8 viene spesso analizzato in vie che controllano la dinamica del citoscheletro, la polarità cellulare e la stabilità della sinapsi immunologica in cellule T, cellule B, cellule NK e cellule dendritiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DOCK 8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DOCK8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DOCK8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DOCK8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DOCK 8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DOCK8 per lo studio della segnalazione di DOCK 8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DOCK8 critici per la funzione di DOCK 8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DOCK8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DOCK 8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DOCK 8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DOCK8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DOCK 8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DOCK 8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DOCK8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DOCK8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.