DOCK 7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426491-ACT

Dock7 codifica a DOCK7, um fator de troca de nucleotídeos de guanina atípico que ativa preferencialmente GTPases da família Rho, como RAC1 e CDC42, para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a polaridade celular e a migração direcionada. No sistema nervoso do camundongo, a DOCK7 contribui para a diferenciação neuronal, o crescimento axonal e a biologia das células de Schwann por meio de redes de sinalização que conectam sinais de membrana à dinâmica do citoesqueleto. Essas funções inserem a DOCK7 em vias que regulam a extensão de neuritos e a mielinização, com relevância mais ampla para a neurobiologia do desenvolvimento e programas de motilidade celular. Alterações na atividade de DOCK7 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e foram estudadas em contextos nos quais a sinalização desregulada de GTPases Rho afeta a morfogênese tecidual e a formação de circuitos neurais.

DOCK 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dock7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DOCK 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dock7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dock7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DOCK 7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dock7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DOCK 7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DOCK 7 em células tumorais com expressão de Dock7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.