DOCK 2 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-430116-ACT-2

マウスDock2はDOCK2をコードしており、DOCK2は造血系細胞に特異的に発現するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）としてRac GTPアーゼを活性化し、リンパ球、好中球などの免疫細胞におけるアクチン細胞骨格の再編成および方向性移動を制御する。DOCK2はケモカイン受容体や抗原受容体シグナルの下流で機能し、PI3KシグナルとRhoファミリーGTPアーゼ制御を結び付ける経路を介して、インテグリン依存的接着、免疫シナプス形成、ならびにリンパ組織内でのトラフィッキングを協調的に調節する。DOCK2の遺伝学的・機能的破綻は自然免疫および獲得免疫応答の低下と関連し、実験系において炎症性／自己免疫様表現型、感染感受性の増大、腫瘍免疫監視の変化に関与することが示唆されている。Dock2マウスの遺伝子編集は、白血球の運動性、走化性、シグナル伝達ネットワークの再配線に関する機序解析を可能にし、炎症、宿主—病原体相互作用、免疫腫瘍学の研究モデルにおいて免疫細胞内因性の寄与を切り分けて検討するための基盤となる。

DOCK 2 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Dock2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DOCK 2 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Dock2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDock2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DOCK 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDock2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDOCK 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDock2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDOCK 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。