Dnmt3L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403892-ACT

ヒトDNMT3LはDnmt3Lをコードしており、Dnmt3Lは触媒活性を持たないDNAメチルトランスフェラーゼ様の補因子として、de novoメチルトランスフェラーゼであるDNMT3AおよびDNMT3Bに結合してその活性を促進し、発生過程におけるDNAメチル化パターンの確立に関与します。Dnmt3Lは非メチル化のヒストンH3テールを認識し、クロマチンに結合したメチル化活性を促進することで、エピジェネティックなサイレンシング、ゲノムインプリンティング、トランスポゾン抑制に寄与します。DNMT3Lに連関した制御は、細胞運命決定を形作るクロマチンリモデリングおよび転写制御経路と連携します。de novoメチル化機構の破綻やDNMT3L依存的エピジェネティック状態の変化は、がんや発生エピジェネティクスに関連する異常な遺伝子サイレンシングやゲノム不安定性の文脈で、しばしば研究対象となっています。

Dnmt3L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNMT3Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dnmt3L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNMT3L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNMT3L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dnmt3Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNMT3L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDnmt3L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNMT3L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDnmt3L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。