Plásmido Doble Nickase (h) Dnmt3a: sc-400323-NIC

DNMT3A codifica Dnmt3a, una metiltransferasa de ADN de novo que establece patrones de metilación de CpG durante el desarrollo y la determinación del destino celular, modulando la accesibilidad de la cromatina y programas transcripcionales a largo plazo. Dnmt3a coopera con DNMT3B para el establecimiento de la metilación y con DNMT1 para su mantenimiento durante la replicación del ADN, integrándose con vías de remodelación epigenética que influyen en la estabilidad del genoma y el silenciamiento de transposones. La alteración de la función de DNMT3A se asocia con una diferenciación hematopoyética desregulada y una amplia reprogramación epigenómica, y las variantes somáticas recurrentes se estudian con frecuencia en modelos de neoplasias mieloides. Como regulador central del control génico dependiente de la metilación, DNMT3A se investiga habitualmente en biología de células madre, maduración de células inmunitarias y epigenética del cáncer.

Dnmt3a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DNMT3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DNMT3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DNMT3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DNMT3A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.