Dnmt2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420034

Panoramica

Trdmt1 codifica Dnmt2, una metiltransferasi dell’RNA citosina-5 altamente conservata che modifica principalmente i tRNA (in particolare la m5C sulla citosina 38), influenzando la stabilità dei tRNA, la fedeltà di decodifica e le risposte cellulari allo stress. Attraverso la regolazione della metilazione dell’RNA, Dnmt2 contribuisce al controllo della traduzione e a reti epitranscrittomiche più ampie che si intersecano con i processi di processamento dell’RNA e con le vie di mantenimento del genoma. Alterazioni dell’attività di TRDMT1/DNMT2 sono state associate a una proteostasi e a un’adattamento allo stress compromessi, con una rilevanza riportata per fenotipi oncogenici e processi neurobiologici in sistemi modello. Nel topo, Trdmt1 è spesso studiato per il suo ruolo nella regolazione dell’espressione genica mediata dall’RNA, nell’omeostasi cellulare e in risposte dipendenti dal contesto a fattori di stress ambientali e metabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dnmt2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trdmt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trdmt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trdmt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dnmt2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trdmt1 per lo studio della segnalazione di Dnmt2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trdmt1 critici per la funzione di Dnmt2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trdmt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trdmt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dnmt2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Dnmt2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trdmt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trdmt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.