DnaJC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405100-ACT

DNAJC3は、小胞体関連のHsp40共シャペロンであるDnaJC3をコードしており、BiP/GRP78と相互作用し、アンフォールドタンパク質応答（UPR）におけるPERK介在性シグナルを抑制することで、プロテオスタシスを調節します。シャペロン活性と小胞体ストレスの感知を結びつけることで、DnaJC3は翻訳制御、タンパク質フォールディング能、ならびにタンパク質毒性ストレスからの回復を調整し、その下流でアポトーシスや炎症性シグナルにも影響を及ぼします。DnaJC3が関与する小胞体ストレス経路の制御異常は、代謝疾患や神経変性の文脈における細胞の脆弱性と関連づけられており、慢性的なUPR活性化は分泌機能やミトコンドリア恒常性を損なう可能性があります。小胞体の品質管理における要所として、DnaJC3は栄養ストレスや酸化ストレス下でのストレス適応、プロテオーム再編成、細胞運命決定の機序研究において重要な対象となります。

DnaJC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNAJC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DnaJC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNAJC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNAJC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DnaJC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNAJC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDnaJC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNAJC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDnaJC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。