DNAH3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410012-ACT

DNAH3は、軸糸性ダイニン重鎖3（dynein axonemal heavy chain 3）をコードしており、微小管に依存するATPアーゼとして、軸糸性の線毛および鞭毛の運動性と構造的完全性に寄与します。ダイニンアーム機構の一部として、DNAH3は線毛／軸糸経路における線毛拍動の生成と、線毛内での協調運動を支え、線毛を有する組織における体液流動や機械感覚シグナル伝達に影響を及ぼします。軸糸性ダイニン構成要素の異常は、左右軸形成異常や男性不妊などを含む線毛病（ciliopathy）関連表現型と広く関連しており、線毛機能の変化はHedgehogなどの発生シグナルプログラムとも交差し得ます。これらの特徴により、DNAH3は、ヒト細胞モデルにおいて線毛駆動プロセス、細胞骨格ダイナミクス、ならびに遺伝子型—表現型の関係を解析するための有用な標的となります。

DNAH3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNAH3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DNAH3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNAH3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNAH3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DNAH3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNAH3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDNAH3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNAH3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDNAH3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。