DNA pol γ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401870-ACT

POLGはDNAポリメラーゼγ（pol γ）をコードしており、これはミトコンドリアにおける主要な複製ポリメラーゼとして、TWNKヘリカーゼおよびミトコンドリア一本鎖DNA結合タンパク質と協調してミトコンドリアDNA（mtDNA）の複製と修復を担います。DNAポリメラーゼγは、mtDNAコピー数とゲノム完全性を維持することで、酸化的リン酸化、ミトコンドリア生合成、ならびにヌクレオチド恒常性を支えています。POLG機能の攪乱はmtDNAの枯渇や欠失の蓄積と関連しており、ミトコンドリアゲノムの不安定性が神経筋疾患や神経変性疾患の表現型につながることを示します。さらにミトコンドリア機能不全はアポトーシス、自然免疫シグナル伝達、細胞代謝に影響するため、POLGはエネルギー産生（バイオエナジェティクス）とストレス応答を結び付ける経路の研究で広く注目されています。

DNA pol γ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POLGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DNA pol γ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POLG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOLG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DNA pol γの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOLG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDNA pol γ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOLG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDNA pol γ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。