DNA-PKCSCRISPR激活质粒(m): sc-422405-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- DNA-PKCS CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- DNA-PKCS CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 DNA-PKCS CRISPR 激活质粒 (m) 和 DNA-PKCS CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Prkdc 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：DNA-PKCS: sc-390849，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
DNA-PKCSCRISPR激活质粒(m) | sc-422405-ACT | 20 µg | $397.00 |
Prkdc 编码 DNA 依赖性蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基 DNA-PKCS，是通过非同源末端连接（NHEJ）修复 DNA 双链断裂的核心调控因子。DNA-PKCS 与 Ku70/Ku80 复合体形成功能性全酶，协同完成断端识别、末端桥接（synapsis）、末端加工与连接，并与 ATM/ATR 信号通路发生串联，以塑造基因毒性应激后的检查点反应。在小鼠细胞中，Prkdc 活性还对淋巴细胞发育过程中的 V(D)J 重排至关重要，从而将该激酶与基因组稳定性及免疫系统成熟联系起来。对 DNA-PKCS 依赖性修复通路的扰动被广泛用于建立放射敏感性、染色体不稳定性以及与癌症生物学和免疫缺陷研究相关的 DNA 修复缺陷模型。
DNA-PKCS CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Prkdc的表达。
DNA-PKCS CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Prkdc基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Prkdc转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性DNA-PKCS表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Prkdc位点，并能够研究内源性位点上依赖于DNA-PKCS的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Prkdc表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DNA-PKCS通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。