DNA Ligase IIICRISPR激活质粒(h): sc-402841-ACT

人类 LIG3 基因编码 DNA 连接酶 III（DNA ligase III），这是一种 ATP 依赖性连接酶，在碱基切除修复过程中对 DNA 单链断裂进行封合，以及在替代性末端连接（alternative end joining）中处理并解析修复中间体方面至关重要。DNA 连接酶 III 通过其在细胞核和线粒体中的作用，维持基因组完整性、促进线粒体 DNA 的维护，并支持细胞在氧化应激和复制相关应激条件下的存活。LIG3 的活性与 PARP1 和 XRCC1 相关的修复复合体相互交叉，并在同源重组受限时影响突变结局。LIG3 表达失调或对 LIG3 介导修复的依赖，与癌症生物学及神经退行性疾病模型中相关的基因组不稳定性表型有关。

DNA Ligase III CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LIG3的表达。

DNA Ligase III CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LIG3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LIG3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性DNA Ligase III表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LIG3位点，并能够研究内源性位点上依赖于DNA Ligase III的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LIG3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DNA Ligase III通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。