Dlx-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401825-ACT

DLX5 codifica o fator de transcrição homeobox Dlx-5, um regulador-chave do padrão embrionário, da diferenciação osteogênica e do desenvolvimento craniofacial e dos membros. O Dlx-5 integra entradas de sinalização do desenvolvimento, incluindo programas transcricionais associados a BMP/TGF-β, para controlar a especificação de linhagens e a expressão de genes da matriz extracelular. Em células humanas, alterações na expressão de DLX5 ou perturbações regulatórias têm sido associadas a malformações congênitas e a estados de diferenciação desregulados, e atividade aberrante foi relatada em contextos de tumorigênese e comportamento metastático. Essas características tornam o DLX5 um nó útil para estudar o controle transcricional de decisões de destino celular, vias relacionadas à morfogênese e redes regulatórias gênicas associadas a doenças.

Dlx-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DLX5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dlx-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DLX5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DLX5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dlx-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DLX5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dlx-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dlx-5 em células tumorais com expressão de DLX5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.