DIS3L2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405372-ACT

ヒトDIS3L2は、細胞質に局在する3′–5′エキソリボヌクレアーゼをコードしており、RNA監視とRNA代謝回転に関与する。特に、TUTaseによるテイリングで生じるオリゴウリジル化RNA基質の分解において重要な役割を担う。異常なpre-miRNAや構造化RNAを選択的に除去することで、DIS3L2は小分子RNAの生合成、転写後の遺伝子発現制御、ならびにストレス下における細胞恒常性に影響を与える。さらに、転写産物の安定性やRNA品質管理ネットワークを形成することで、増殖や分化を制御する経路とも連動している。DIS3L2機能の変化は、発生異常や腫瘍関連の表現型と関連づけられており、RNA分解の破綻が疾患関連の遺伝子発現プログラムにどのように寄与するかを研究するうえで有用な結節点となる。

DIS3L2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DIS3L2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DIS3L2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DIS3L2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDIS3L2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DIS3L2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDIS3L2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDIS3L2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDIS3L2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDIS3L2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。