Dia 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420000-KO-2

Panoramica

Diaph1 (mDia1) codifica la formmina Dia1, un fattore di nucleazione e di allungamento dell’actina che coordina l’assemblaggio lineare della F-actina a valle delle GTPasi della famiglia Rho, inclusa RhoA. Dia1 sostiene i processi di rimodellamento del citoscheletro, come la polarizzazione cellulare, l’adesione, la citochinesi e la migrazione direzionata, collegando i segnali intracellulari alla dinamica dell’actina e alla stabilizzazione dei microtubuli. Grazie a queste funzioni, Diaph1 è spesso studiato in vie che regolano il traffico delle cellule immunitarie, il comportamento delle barriere vascolari ed epiteliali e la meccano-trasduzione. Un’attività alterata di DIAPH1 è stata associata a patofisiologie legate al citoscheletro, inclusi fenotipi piastrinici ed ematologici e una perdita uditiva neurosensoriale progressiva, stimolando studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Diaph1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Diaph1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Diaph1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dia 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Diaph1 per lo studio della segnalazione di Dia 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Diaph1 critici per la funzione di Dia 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Diaph1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dia 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Dia 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Diaph1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dia 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Dia 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Diaph1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Diaph1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.