DHCR24 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405507-NIC

DHCR24は、24-デヒドロコレステロール還元酵素をコードしており、小胞体に局在する酵素としてデスモステロールをコレステロールへ還元することで、コレステロール生合成の最終段階を触媒します。Bloch経路における役割を通じて、DHCR24は膜ステロール組成、脂質ラフトの構築、ならびに小胞体（ER）の恒常性や酸化ストレス応答と交差するステロール感受性のシグナル伝達ネットワークに影響を与えます。DHCR24活性が攪乱されると、デスモステロール／コレステロールのバランスが変化し、ステロール依存的な状況下での細胞分化や代謝適応に影響を及ぼし得ます。DHCR24の発現や機能の変化はコレステロール代謝異常症で報告されており、ストレス耐性や脂質リモデリングとの関連から、神経変性や腫瘍モデルにおいても研究されています。

DHCR24 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DHCR24 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DHCR24内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DHCR24の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DHCR24が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。