Plásmido CRISPR de Activación (h) DGLUCY: sc-413322-ACT

C14orf159 codifica DGLUCY, una proteína mitocondrial implicada en la expresión génica mitocondrial y la homeostasis de la cadena respiratoria. Estudios funcionales recientes asocian DGLUCY con la regulación de la eficiencia de la fosforilación oxidativa, procesos vinculados al ribosoma mitocondrial y las respuestas celulares al estrés metabólico. Se ha debatido la alteración de la actividad de DGLUCY en el contexto de fenotipos de disfunción mitocondrial, donde los cambios en la capacidad bioenergética pueden influir en el equilibrio redox y en la susceptibilidad al estrés. Como resultado, DGLUCY suscita interés para la investigación mecanística del metabolismo mitocondrial, las vías de control de calidad y estados relevantes para enfermedad caracterizados por una función mitocondrial deteriorada.

DGLUCY El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C14orf159 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DGLUCY El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C14orf159 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C14orf159, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DGLUCY. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C14orf159 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DGLUCY en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DGLUCY en células tumorales con expresión de C14orf159 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.