Desmin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400248

Panoramica

DES codifica la desmina, una proteina dei filamenti intermedi di tipo III che forma un’impalcatura citoscheletrica essenziale nelle cellule muscolari cardiache, scheletriche e lisce. La desmina si integra con le strutture del disco Z e collega le miofibrille a mitocondri, nuclei e sarcolemma, supportando la meccanotrasduzione, il posizionamento degli organelli e l’integrità della contrazione. Partecipa all’organizzazione del citoscheletro e ai processi di risposta allo stress che influenzano la stabilità e il rimodellamento delle cellule muscolari. L’alterazione di DES è associata a miopatie e cardiomiopatie correlate alla desmina, caratterizzate da aggregazione proteica e disfunzione muscolare progressiva, rendendolo rilevante per studi sulla proteostasi e sui meccanismi di degenerazione muscolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Desmin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DES in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DES insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DES a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Desmin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DES per lo studio della segnalazione di Desmin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DES critici per la funzione di Desmin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DES per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Desmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Desmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DES. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Desmin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Desmin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DES per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DES definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.