Derlin-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408875-NIC

ヒトDERL2はDerlin-2をコードしており、Derlin-2は多回膜貫通型の小胞体（ER）膜タンパク質である。Derlin-2はER関連分解（ERAD）において、ミスフォールドしたER内腔タンパク質および膜タンパク質の逆行輸送（レトロトランスロケーション）を促進し、ユビキチン–プロテアソーム系による分解へと導くことで機能する。Derlin-2はp97/VCP、ユビキチンリガーゼ、および関連アダプターと協調して働き、アンフォールドタンパク質応答（UPR）下でのプロテオスタシス維持やERストレスシグナルの抑制に寄与する。分泌タンパク質および膜タンパク質の品質管理における役割を通じて、DERL2は細胞のストレス適応、炎症、抗原処理に関連する経路にも影響を及ぼす。ERAD能の破綻や慢性的なERストレスは、がん生物学、神経変性、代謝性疾患のモデルに広く関与することが示されており、そのためDERL2はプロテオスタシス依存的表現型の機構解明研究における有用な結節点となる。

Derlin-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DERL2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DERL2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DERL2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DERL2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。