DEPTOR CRISPR Activationプラスミド (m): sc-430194-ACT

DeptorはDEPTORをコードしており、DEPTORはDEPドメインを含む足場（スキャフォールド）タンパク質としてmTOR複合体に結合してその機能を調節し、mTORC1およびmTORC2の両方のシグナル出力に影響を与えます。栄養感知、タンパク質合成、オートファジー、細胞骨格制御への作用を通じて、DEPTORは細胞の成長や代謝適応の調整に寄与します。DEPTORの発現変動は、がん生物学、インスリンシグナル、免疫細胞機能などの文脈においてmTOR経路活性の破綻と関連づけられており、経路のフィードバックやストレス応答を研究する上で有用な結節点となります。マウスモデルでは、DeptorはmTORネットワークの配線（ネットワーク構造）が増殖、分化、組織恒常性をどのように規定するかを解析するための扱いやすい入口となります。

DEPTOR CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Deptorの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DEPTOR CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Deptor 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDeptor転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DEPTORの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDeptor遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDEPTOR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDeptor発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDEPTOR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。