DENND5B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414817-ACT

DENND5B は、Rab GTPase 依存性の膜輸送の制御に関与するとされる DENN ドメイン含有タンパク質をコードしており、小胞出芽、エンドソーム輸送、区画化されたシグナル伝達の協調に寄与します。小型 GTPase のサイクルやカーゴの選別に影響することで、DENND5B は受容体のターンオーバー、細胞内タンパク質の局在、さらには極性や増殖といったより広範な細胞過程にも影響し得ます。DENND5B のような輸送制御因子の発現変化や機能破綻は、がん関連の表現型を含むさまざまなヒト疾患の文脈で観察される、シグナル伝達ネットワークの破綻やゲノム／機能的変化と関連づけられてきました。そのため、DENND5B は、エンド膜動態を細胞状態の制御やストレス適応と結び付ける経路の研究で頻繁に解析対象となっています。

DENND5B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DENND5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DENND5B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DENND5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDENND5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DENND5Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDENND5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDENND5B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDENND5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDENND5B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。