DEC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402891-ACT

BHLHE41は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子DEC2をコードしており、E-boxモチーフに結合して概日リズムの転写ネットワークや細胞状態プログラムを調節する核内レギュレーターである。DEC2は中核時計因子からの入力を統合し、リズミックな遺伝子発現を睡眠—覚醒のタイミング、代謝適応、低酸素に伴う転写リモデリングを含む細胞ストレス応答などの過程に結び付ける。免疫系および上皮の文脈では、DEC2は環境刺激の下流における転写出力を形成することで、分化や炎症シグナル伝達に関与すると報告されている。BHLHE41/DEC2活性の破綻は、文献上、睡眠表現型の変化や、腫瘍生物学および代謝疾患モデルにおける状況依存的な役割と関連付けられており、転写制御の機構研究を支持する知見となっている。

DEC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BHLHE41の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DEC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BHLHE41 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBHLHE41転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DEC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBHLHE41遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDEC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBHLHE41発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDEC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。