Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DEC-205 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417220
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DEC-205 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DEC-205, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DEC-205 Antibody (F-4): sc-515016
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DEC-205 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417220 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
LY75 codifica per DEC-205 (CD205), un recettore endocitico multilettinico della famiglia dei recettori per il mannosio, altamente espresso dalle cellule dendritiche e da altre cellule presentanti l’antigene. DEC-205 favorisce l’acquisizione altamente efficiente e l’instradamento degli antigeni proteici verso compartimenti endosomiali/lisosomiali, supportando la presentazione su MHC di classe II e, in alcune condizioni, la cross-presentazione per il priming delle cellule T CD8+. Grazie al suo ruolo nella cattura e nel processamento dell’antigene e nel bilanciamento tra tolleranza immunitaria e attivazione, LY75 è frequentemente utilizzato per studiare i programmi di maturazione delle cellule dendritiche e la polarizzazione della risposta immunitaria adattativa. Alterazioni dell’espressione e del traffico di DEC-205 sono state associate a contesti infiammatori e autoimmuni e vengono studiate anche in immunologia dei tumori come marcatori e mediatori funzionali degli stati di presentazione dell’antigene.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DEC-205 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LY75 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LY75 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LY75 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DEC-205.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LY75 per lo studio della segnalazione di DEC-205, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni LY75 critici per la funzione di DEC-205
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LY75 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DEC-205 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DEC-205 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LY75. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DEC-205 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DEC-205 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LY75 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LY75 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.