DDX3X CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401253-ACT

DDX3X は、保存性の高い DEAD-box 型 RNA ヘリカーゼをコードしており、RNA の二次構造やリボ核タンパク質複合体を再構成することで、転写調節、pre-mRNA のプロセシング、mRNA 輸送、翻訳開始、ストレス顆粒の動態など、RNA 代謝の複数段階を統合的に制御します。ヒト細胞において DDX3X は、自然免疫応答や細胞ストレスプログラムを形作るシグナル入力を統合し、RNA センシングをインターフェロン関連経路および翻訳制御へと結び付けます。DDX3X の活性や発現の変化は、増殖制御の破綻、異常なストレス応答、ゲノム維持機構の欠陥と関連付けられており、がん生物学や神経発達障害の機序研究において重要です。多機能な RNA ヘリカーゼとして、DDX3X は転写後遺伝子制御や経路間クロストークを解析するためのハブ（結節点）としてしばしば用いられます。

DDX3X CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDX3Xの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDX3X CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDX3X 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDX3X転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDX3Xの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDX3X遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDX3X依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDX3X発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDX3X経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。