DDIT3/CHOP/GADD153 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419970-ACT

Ddit3 は、ストレス誘導性転写因子である DDIT3/CHOP/GADD153 をコードしており、統合ストレス応答および小胞体（ER）ストレスによって駆動される小胞体アンフォールド・プロテイン・レスポンス（UPR）の中核的エフェクターです。CHOP は C/EBP ファミリー分子とヘテロ二量体を形成し、プロテオトキシックストレスや代謝ストレス下において、アポトーシス、オートファジー、酸化還元（レドックス）バランス、細胞周期制御に影響する遺伝子発現プログラムを再編成します。マウス細胞では、Ddit3 は PERK–eIF2α–ATF4 シグナル伝達の下流における ER ストレスの分子リードアウトとして一般的に用いられ、ミトコンドリア機能障害や炎症経路とも交差します。Ddit3 活性の制御異常は、代謝疾患、神経変性、組織障害、腫瘍生物学のモデルで関与が示されており、ストレス適応や細胞運命決定の機構研究における有用性を支持しています。

DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ddit3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ddit3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDdit3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDIT3/GADD153/CHOPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDdit3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDIT3/GADD153/CHOP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDdit3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDIT3/GADD153/CHOP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。