DDIT3/CHOP/GADD153 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400051-ACT

DDIT3（CHOP/GADD153としても知られる）は、小胞体アンフォールディッドプロテインレスポンス（UPR）および統合ストレス応答（ISR）からのシグナルを統合する、ストレス誘導性のbZIP転写因子をコードします。小胞体ストレス下ではPERK–eIF2α–ATF4経路の下流で強く誘導され、アポトーシス、オートファジー、酸化還元バランス、細胞周期制御を担う転写プログラムを調節します。DDIT3は、タンパク質フォールディング、アミノ酸代謝、ミトコンドリア機能に関与する遺伝子の発現を変化させることで、ストレスに対する適応的な転帰と終末的な転帰のバランスに影響を与えます。DDIT3シグナルの破綻は、プロテオトキシックストレス下でのがん細胞の生存、代謝性および神経変性関連のストレス表現型、ならびに粘液型脂肪肉腫におけるFUS–DDIT3のような腫瘍性融合イベントと関連づけられています。

DDIT3/CHOP/GADD153 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDIT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDIT3/CHOP/GADD153 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDIT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDIT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDIT3/CHOP/GADD153の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDIT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDIT3/CHOP/GADD153依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDIT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDIT3/CHOP/GADD153経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。