DDI2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408297-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DDI2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DDI2ダブルニカースプラスミド（h）およびDDI2ダブルニカースプラスミド（h2）は、DDI2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: DDI2 抗体 (A-3): sc-514004
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DDI2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408297-NIC | 20 µg | $410.00 |
DDI2（DNA damage inducible 1 homolog 2）は、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）とストレス適応的な転写を支えるアスパラギン酸プロテアーゼ様因子をコードしており、とりわけプロテアソーム阻害後に小胞体（ER）係留型転写因子NFE2L1/NRF1をプロセシングすることで、プロテアソームの回復を可能にします。NRF1依存性のこの経路を介して、DDI2はプロテアソームサブユニットやその他の品質管理関連遺伝子の発現を協調的に制御し、ユビキチン依存的な分解回転と、プロテオトキシックストレスに対する細胞応答とを結び付けます。DDI2の機能はER関連分解（ERAD）や、より広範な小胞体アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナルとも交差し、タンパク質分解能が低下した状況で細胞がどのように適応するかに影響を与えます。この軸の破綻は、がん細胞のストレス耐性や神経変性疾患に関連するプロテオスタシス異常とも関係するため、DDI2はプロテアソーム恒常性の機構研究に有用な標的となります。
DDI2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DDI2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DDI2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DDI2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DDI2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。