DCC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401035-ACT

DCC（deleted in colorectal carcinoma）は、ネトリン-1受容体であると同時にディペンデンス受容体をコードしており、細胞外マトリックスからのシグナルに応答して、軸索ガイダンス、神経細胞の移動、ならびに細胞骨格リモデリングを協調的に制御します。発生神経生物学に加えて、DCCシグナルは細胞接着、極性、アポトーシスを制御する経路とも連携し、Rho GTPaseのダイナミクスやMAPK/PI3Kに連結したプロセスに下流効果を及ぼします。DCCの発現や機能の変化は、神経回路形成の破綻や腫瘍生物学と関連づけられており、ネトリン–DCCシグナルの変調は、生存シグナル、浸潤、上皮間葉系様の挙動に影響し得ます。これらの特性により、ヒトDCCは、ガイダンス因子シグナルの伝達、細胞間相互作用、ならびに状況依存的なアポトーシス応答を研究するうえで有用な標的となっています。

DCC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DCCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DCC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DCC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDCC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DCCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDCC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDCC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDCC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDCC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。