Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
DBH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402441
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- DBH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico DBH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DBH Anticuerpo (A-9): sc-365710
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
DBH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402441 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La dopamina beta-hidroxilasa (DBH) codifica una monooxigenasa dependiente de cobre que cataliza la conversión de dopamina en noradrenalina dentro de las vesículas secretoras de las neuronas simpáticas y de las células cromafines de la médula suprarrenal. Al controlar la biosíntesis de catecolaminas, DBH influye en la señalización adrenérgica, las respuestas neuroendocrinas al estrés y las vías posteriores mediadas por GPCR que regulan el tono cardiovascular y el estado de alerta del sistema nervioso central. Las variaciones en la expresión de DBH o en su actividad enzimática se han asociado con alteraciones de la homeostasis de la noradrenalina y se han estudiado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y disfunción autonómica. Por lo tanto, DBH es una diana útil para analizar el flujo de la vía de las catecolaminas, el acoplamiento estímulo-secreción y el equilibrio de neurotransmisores en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO DBH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DBH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DBH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DBH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DBH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DBH para la investigación de la señalización de DBH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DBH críticos para la función de DBH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DBH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido DBH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DBH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DBH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DBH (h) y el plásmido HDR DBH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DBH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DBH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.