Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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DBH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402441
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DBH Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DBH, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DBH Antibody (A-9): sc-365710
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DBH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402441 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La dopamina beta-idrossilasi (DBH) codifica una monoossigenasi rame-dipendente che catalizza la conversione della dopamina in noradrenalina all’interno delle vescicole secretorie dei neuroni simpatici e delle cellule cromaffini della midollare surrenale. Controllando la biosintesi delle catecolamine, la DBH influenza la segnalazione adrenergica, le risposte neuroendocrine allo stress e le vie a valle mediate da GPCR che regolano il tono cardiovascolare e lo stato di attivazione del sistema nervoso centrale. Variazioni dell’espressione della DBH o della sua attività enzimatica sono state associate a un’alterata omeostasi della noradrenalina e sono state studiate nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici e di disfunzioni autonomiche. La DBH è quindi un bersaglio utile per analizzare il flusso della via delle catecolamine, l’accoppiamento stimolo-secrezione e l’equilibrio dei neurotrasmettitori in modelli cellulari umani.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DBH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DBH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DBH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DBH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DBH.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DBH per lo studio della segnalazione di DBH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DBH critici per la funzione di DBH
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DBH per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DBH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DBH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DBH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DBH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DBH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DBH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DBH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.